一、基本概念區(qū)分

• 原始標(biāo)準(zhǔn)菌株（第0代）：由權(quán)威保藏機(jī)構(gòu)（如ATCC、CMCC、CGMCC等）提供，通常以凍干或超低溫形式保存。

• 儲(chǔ)備菌株（第1代）：由標(biāo)準(zhǔn)菌株首次活化后制備并冷凍保存，用于后續(xù)傳代。

• 工作菌株（第2–4代）：由儲(chǔ)備菌株傳代獲得，用于日常實(shí)驗(yàn)或質(zhì)量控制，傳代次數(shù)不得超過(guò)5代（依據(jù)《藥品微生物實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理指導(dǎo)原則》9203）。

⚠️ 超過(guò)5代可能導(dǎo)致遺傳漂變、表型改變或喪失標(biāo)準(zhǔn)特性。

二、傳代前準(zhǔn)備

物料平衡：

人員防護(hù)：

更換專(zhuān)用潔凈服，佩戴N95口罩、無(wú)菌手套；

三、標(biāo)準(zhǔn)傳代操作流程

步驟1：活化（第0代 → 第1代）

• 從凍存管（如-80℃甘油管或凍干管）中取菌；
• 接種至非選擇性固體培養(yǎng)基（如營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面或平板）；
• 適宜溫度培養(yǎng)（如35±1℃，18–24小時(shí)）；
• 獲得第1代儲(chǔ)備菌株，部分用于保存，部分用于下一輪傳代。

步驟2：傳代培養(yǎng)（第1代 → 第2–4代工作菌株）

常用方法包括：

所有工具（接種環(huán)、針、移液器吸頭等）必須無(wú)菌，使用前后灼燒或更換。

四、記錄與標(biāo)識(shí)

每支菌株必須標(biāo)注并記錄以下信息：

• 菌種名稱（含屬、種、保藏編號(hào)，如 E. coli ATCC 25922）
• 傳代日期
• 當(dāng)前代數(shù)（如P2、P3）
• 培養(yǎng)基類(lèi)型與培養(yǎng)條件（溫度、時(shí)間、需氧/厭氧）
• 保藏位置（冰箱編號(hào)、凍存盒位置）
• 操作人簽名

建議使用電子或紙質(zhì)《菌種傳代與使用記錄表》，實(shí)現(xiàn)全程可追溯。

五、保存與銷(xiāo)毀

• 短期保存：斜面4–6℃，保存數(shù)周至數(shù)月，需定期轉(zhuǎn)接；

• 長(zhǎng)期保存：甘油管（-80℃）、冷凍干燥、液氮等；

• 銷(xiāo)毀：污染或超代菌株需經(jīng)121℃高壓滅菌30分鐘以上后廢棄。

六、關(guān)鍵法規(guī)依據(jù)（截至2025年）

• 《中國(guó)藥典》通則9203《藥品微生物實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理指導(dǎo)原則》
• 《微生物實(shí)驗(yàn)室菌株管理全流程規(guī)范》
• ISO 11133:2014（培養(yǎng)基質(zhì)量控制）
• 各保藏中心（ATCC/CGMCC等）提供的說(shuō)明書(shū)

總結(jié)：
從原始菌種到工作菌株，核心在于控制代數(shù)、防止污染、規(guī)范操作、完整記錄。只有嚴(yán)格遵循標(biāo)準(zhǔn)化流程，才能確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性與合規(guī)性。

注：以上僅供參考，本試劑僅供科研使用，不作為實(shí)際數(shù)據(jù)，實(shí)驗(yàn)需嚴(yán)格遵循說(shuō)明或咨詢技術(shù)老師。