1．細(xì)胞收集：懸浮細(xì)胞直接收集10ml的離心管中，而帖壁細(xì)胞先用滴管輕輕吹打，調(diào)亡細(xì)胞一經(jīng)吹打可能脫壁，收集到10ml的離心管中，沒(méi)脫壁的細(xì)胞用0.02％的EDTA消化使之脫壁，每樣本細(xì)胞數(shù)為（1～5）×106，500～1000r/min離心5min棄去培養(yǎng)液。
2．用孵育緩沖液洗1次，500～1000r/min離心5min。
3．用100μl的標(biāo)記溶液重懸細(xì)胞，室溫下避光孵育10～15min。
4．500～1000r/min離心5min沉淀細(xì)胞，孵育緩沖液洗1次。
5．加入熒光溶液4℃下孵育20min，避光并不時(shí)振動(dòng)。