手機(jī)版
洗滌是ELISA實驗的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，其重要性主要體現(xiàn)在以下方面：
一、去除未結(jié)合物質(zhì)
通過緩沖液洗去未特異性結(jié)合的游離抗原、抗體或酶標(biāo)記物，確保信號僅來源于目標(biāo)物結(jié)合。若洗滌不凈，殘留的游離酶標(biāo)記物會導(dǎo)致假陽性或高背景信號。
二、降低非特異性干擾
聚苯乙烯微孔板易吸附蛋白質(zhì)等雜質(zhì)，洗滌可清除非特異性結(jié)合的干擾物質(zhì)，提高檢測特異性。例如，樣本中的脂質(zhì)或血紅蛋白可能通過物理吸附干擾結(jié)果，洗滌能有效減少此類影響。
三、保證信號準(zhǔn)確性
洗滌質(zhì)量直接影響信噪比。充分洗滌可保留特異性結(jié)合信號，避免非目標(biāo)物質(zhì)參與顯色反應(yīng)，確保OD值真實反映目標(biāo)物濃度。
關(guān)鍵操作要點
1.洗滌液配制：
濃縮洗液需溶解鹽結(jié)晶后稀釋，避免離子濃度偏差影響洗滌效果。
2.洗滌方式：
手工洗板需拍干，避免孔間交叉污染;
洗板機(jī)需檢查針頭通暢性，確保每孔洗滌量一致(通常200-300μL/孔)。
3.洗滌次數(shù)：通常3-5次，高背景樣本可增加至5次。
常見問題與解決方案
高背景：增加洗滌次數(shù)或更換含吐溫20的洗滌液;
洗滌不勻：使用多通道移液器或洗板機(jī)標(biāo)準(zhǔn)化操作。
洗滌步驟的優(yōu)化可顯著提升ELISA的重復(fù)性和準(zhǔn)確性，需嚴(yán)格遵循試劑盒說明操作。
注：以上僅供參考，不作為實際數(shù)據(jù)，實驗需嚴(yán)格遵循說明或咨詢技術(shù)老師。
