無菌操作常見誤區(qū)與糾正指南
無菌操作是微生物實驗、細胞培養(yǎng)等工作的基石?此坪唵蔚牟僮鞅澈,卻隱藏著許多容易忽視的誤區(qū)。
在實驗室環(huán)境中,一次微小的污染事件便足以導(dǎo)致長達數(shù)周的實驗工作前功盡棄。無論是珍貴細胞系被真菌污染而喪失活性,還是關(guān)鍵微生物實驗因雜菌侵入而宣告失敗,均凸顯出無菌操作技術(shù)在保障實驗成功中的核心地位。熟練掌握規(guī)范的無菌操作,不僅是一項基礎(chǔ)實驗技能,更體現(xiàn)了科研人員嚴謹?shù)目茖W(xué)態(tài)度與專業(yè)的實驗素養(yǎng)。
乙醇消毒:萬能抑或局限?
❌ 錯誤認知:
在實驗操作中,一種普遍存在的誤解是認為僅依靠酒精棉球?qū)κ植炕蚺_面進行擦拭即可實現(xiàn)有效去污,甚至將乙醇溶液視作可替代一切滅菌措施的“萬能解決方案”。這種觀念往往導(dǎo)致對實驗器械及操作環(huán)境進行徹底滅菌的忽視,從而埋下污染隱患。
✅ 糾正指南:
75%的酒精具有最佳的殺菌效果,但它只能表面消毒,無法達到滅菌要求(即殺死所有微生物包括芽孢)。對于手術(shù)器械、培養(yǎng)基、試管等,必須采用高壓蒸汽滅菌(121°C, 20-30分鐘)或干熱滅菌等物理方法。
📌 實用貼士:
酒精擦拭后,務(wù)必等待其自然風(fēng)干,揮發(fā)的過程才是殺菌的關(guān)鍵。切勿心急用嘴吹或用手扇。
無菌手套:物理屏障或潛在污染源?
❌ 錯誤操作:
戴上無菌手套后,下意識地摸了摸頭發(fā)、調(diào)整了眼鏡、甚至接聽了電話……這些動作都會讓手套瞬間從“無菌”變?yōu)椤坝芯薄?/span>
✅ 糾正指南:
將手套視為你的“第二層皮膚”。它本身并不無菌,你的手在哪個位置,手套就在哪個位置被污染。一旦觸摸了非無菌區(qū)域,應(yīng)立即用75%酒精噴灑消毒或更換新手套。
📌 實用貼士:
在超凈臺內(nèi)準備一個小型免洗消毒液瓶,隨時對手套進行消毒。操作時,手臂盡量不要離開臺面區(qū)域。
超凈工作臺:相對潔凈而非絕對無菌
❌ 錯誤操作:
在超凈臺內(nèi)擺放過多物品,操作時手臂頻繁穿梭,快速移動產(chǎn)生氣流,甚至有人在臺內(nèi)大聲說話、咳嗽,這些都會破壞臺內(nèi)的單向流氣流,導(dǎo)致污染。
✅ 糾正指南:
1. 物品分區(qū):將臺面分為三區(qū)。清潔區(qū)(遠離操作者的一側(cè))放置待使用的無菌物品;操作區(qū)(中間)進行實驗;污染區(qū)(靠近操作者的一側(cè))放置廢棄物品。
2. 提前準備:將所有所需物品一次性放入臺內(nèi),并經(jīng)過紫外線照射30分鐘后再開始操作。
3. 動作輕柔:所有操作都應(yīng)緩慢、輕柔,避免擾亂氣流。
接種環(huán)燒一燒就夠了?
❌ 錯誤操作:
將接種環(huán)在火焰外焰隨意晃兩下,沒有燒至通紅,或者灼燒后未冷卻就直接蘸取菌液,燙死了待操作的微生物。
✅ 糾正指南:
采用全程灼燒法:先將接種環(huán)(針)豎直插入火焰最底部的藍色內(nèi)核部分,直至整體燒紅,并保持3-5秒。然后,灼燒可能進入試管的金屬桿部分。最后,在空氣中冷卻數(shù)秒(可靠近手背感知溫度,不燙即可),再進行取樣。
📌 實用貼士:
灼燒后冷卻的接種環(huán)在放入菌液時不應(yīng)發(fā)出“滋”的聲音。
培養(yǎng)基暴露:規(guī)范操作與無菌控制
❌ 錯誤操作:
打開培養(yǎng)皿或試管蓋后,長時間暴露在空氣中,或者將皿蓋完全取下、隨意放置。
✅ 糾正指南:
1. 培養(yǎng)皿:打開時,應(yīng)將皿蓋開啟一個小于45°的縫隙,剛好足以完成劃線或涂布操作即可。操作完成后立即蓋好。
2. 試管/三角瓶:開啟后,瓶口應(yīng)迅速過火,利用氣流原理形成屏障,防止空氣中的雜菌落入。操作后同樣迅速過火并蓋緊。
📌 實用貼士:
暫時不用的已倒平板,可用封口膜或Parafilm封口膜密封邊緣,防止水分蒸發(fā)和污染。
無菌操作是一場與無處不在的微生物進行的“隱形戰(zhàn)爭”。勝利的關(guān)鍵在于嚴謹?shù)膽B(tài)度、規(guī)范的操作和對細節(jié)的極致追求。記住,每一次成功的實驗背后,都離不開無數(shù)個無菌操作的精準瞬間。