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1. 操作不一致性
加樣誤差：移液器未校準(zhǔn)、吸頭松動(dòng)或加樣速度不均會(huì)導(dǎo)致孔間差異。
溫育與洗滌條件：孵育時(shí)間、溫度或洗滌次數(shù)不一致(如靜置時(shí)間不足15秒)直接影響信號(hào)穩(wěn)定性。
人員差異：不同操作者的手法(如拍干力度)可能引入批間變異。
2. 樣本處理問(wèn)題
樣本不均一：未充分混勻或移液位置不一致導(dǎo)致濃度差異。
溶血/污染：溶血樣本中的血紅蛋白干擾顯色，或樣本中殘留纖維蛋白形成假陽(yáng)性。
3. 試劑與設(shè)備因素
封閉不充分：未阻斷非特異性結(jié)合位點(diǎn)，導(dǎo)致背景信號(hào)波動(dòng)。
酶標(biāo)板損傷：洗板或加樣時(shí)劃傷包被表面，影響抗體結(jié)合效率。
邊緣效應(yīng)：外周孔因蒸發(fā)或溫度差異導(dǎo)致顯色不均。
4. 環(huán)境與質(zhì)量控制
交叉污染：重復(fù)使用封板膜或吸頭導(dǎo)致孔間污染。
儀器校準(zhǔn)：酶標(biāo)儀濾光片設(shè)置錯(cuò)誤或波長(zhǎng)選擇不當(dāng)影響讀數(shù)一致性。
優(yōu)化建議
標(biāo)準(zhǔn)化操作：固定溫育時(shí)間(如37℃±1℃)、使用同一批試劑盒。
質(zhì)控樣本：每板加入陽(yáng)性/陰性對(duì)照，監(jiān)控批內(nèi)CV值(目標(biāo)<10%)。
通過(guò)嚴(yán)格規(guī)范操作流程、優(yōu)化樣本處理及定期校準(zhǔn)設(shè)備，可顯著提升ELISA重復(fù)性。
注：以上僅供參考，不作為實(shí)際數(shù)據(jù)，實(shí)驗(yàn)需嚴(yán)格遵循說(shuō)明或咨詢技術(shù)老師。
